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【書き起こし】「共焦点レーザー顕微鏡と超解像顕微鏡の基礎と原理1」（ライカマイクロシステムズ）[＃006]
(00:00) ありがとうございますライカマイクロシステムズの田中と申します 私の方からはこちらにありますので共焦点レーザー案件にきょう東京会場の警備今日の 縁についてですね それぞれお話をさせていただきたいと思います アプリケーション j などを実際のデータを交えながらお話しさせていただきますの で それぞれ今日少年勝敗像を使ってどういったことができるのかなあというのを見て 頂ければと思います プレゼンテーションの中ですね私できないデータもございまして一部をてほしいように なり シートもございますが予めご了承いただければと思いました では 始めさせていただきますまず共焦点レーザー顕微鏡ですね こちらの方も広く一般的に使われているイメージング機器になりますけれども使用する 目的の法案 ki でライフ三枝研究分野で多く広く使われております映画官公庁の 研究機関間エリア振り学薬学や能楽などの 各研究のあるいは製薬メーカーさんですとか 薬品の開発敬遠商品や日用品のメーカーさんですとか整理していないでも紅葉系の妖刀
(01:11) で異物検査です半導体生地ぎょうさんでもこれを使いいただいているようなことが ございます 観察するものを s day 絵付けに言いますと s であり細胞ログ植物の細胞ですとか最近 あと最近リスト動物園食事の後単位をそのままみたりといったことも景況車線県境で 行われていらっしゃいます 実際のデータが行くとか見ていただきますとこちらのは神経細胞ですねえええ これからショウジョウバエを組織して賞受賞いうのが直接見たものになりますけれども 神経軸索の双方見たものを言いますこういった柄マルチから複数の疲労を曽根負けて いただいてそれぞれの入っ 二鋭角に対して作用が同杯こうしているのかといっても見ていただくということができ ます あと a 先ほどご紹介した動物の古代そのまま見るといったことですねこちらの方は ゼブラフィッシュを 入る発生過程どこで撮影したものになります3次元的に行って1時間軸で巨時間 観察をしまして二村串がどういうふうにそうなっていくのを買っていた所を見ていく
(02:18) ことができます あと a 好評系のサンプルの例ですと これがですねごはんさんので1レンジでチンするご飯フィルムなどをですね race ライブがらずに貼り付けまして 非破壊の状態でフィルムの総行動ですねこういった3次元的に見ていただこういう 工業系の観察でもしていたことができます でも影響焦点レーザー顕微鏡の原理についてですけれども影響招待レーダー兼備では ですね蛍光顕微鏡をベースとしております で蛍光顕微鏡を使ってですね蛍光観察する時にはこちらにありますように 蛍光フィルターキューブというものを用いまして ce ランクの高原から一応なる 駅波長を取り出しましてサンプルに照射します サンプルから帰ってきた傾向また必要な波長の息だけをフィルターで完投してやること によってメディ 見ていただくというものになります 京商丁寧な受身文を迎えてみますと こちらにあります傾向フィルター径部の関係と同じことがいる
(03:24) で ok 出来にはですねレーザー光源を使用しまして レーザーがサンプルに照射されてサンプルから帰っていた傾向の光が 見識のコインもどって来るというところになります ですので a 観察をする傾向を観察する時の原因については蛍光顕微鏡共焦点レーザー顕微鏡も基本 原理を同じという風に見えると思います では実際に画像に比べていますと左が並行顕微鏡でパン者としたの兵氷見が今日小川令 3型ビデオでそれぞれ均等の てい 糸球体のみたのでありますけれども見ていただくますわかるように影響商店で状態の方 が 蛍光顕微鏡に比べてよりはっきりと繰り上げ ま細かいところの構造まで見ていたことができていると思います でますこれは何でこういった画像の違いが出てくるのかというと 通常の蛍光形提供あるいはカメラなどで撮影をしたパーに厚みのあるサンプルに対して 狡猾のあっていないところを観察している
(04:30) 上下二の部分の情報を一部目あるいはカメラの方に入っていきますこれが英語圏の原因 になるわけですねそれに対しまして今日車 大勢レーザー顕微鏡の場合はこちらの見識の周り今日書店ピンホールというものが 構造の中に組み込まれております観察をする時にこの4かつ何て言いま赤で示した部分 ここからのシグナルだけがこの共焦点ピンホールを通り抜けて現地系の方に入ることが できます この時に 豪華数で以外の新ある今赤で示しているこういった場所から帰ってくる日かについては 行商店ピンホールを抜けることができないために言質の中に入ることができません これによってある特定の薄いところの情報だけが建設される こういったことで特にいって深さ方向の分配を終えることができる 僕の内容を取ることができますので先ほど観ていただいたように 影響位蛍光形人に比べてより特にファンサ方向に対してはっきりとした絵をとっていた ことができるようになります
(05:34) 京商定例だけ見てもですねレーザー光源に使用しております てい もしキー こちらが対物レンズでレーサーですね服す1方向に操作しまして 企業の上をですねコーナー取るような形でレーザーが3工場を操作していきます ピント名は変えながらですねどんどんを通っていくことによってそれぞれの弾そぉ事に ピントの合った状態の情報を得ることができるようになってまいります ですね ct スキャンをとっているイメージの猫 これを繰り返すことによって厚木のあるサークルの情報を得る言葉に非常になって まいります おっ 馬申しましたように a 去年レーザー顕微鏡はレーザーを光源として使用しております
(06:43) ガルバのみなぁという2枚のみプミラ鏡を使いまして a さんを x 5出雲強い方向に操作してあります それプラスしまして狡猾ピント面を変えながら撮影することによって先ほど観て いただいたような 立海の情報を得ることができるようになってまいります ですので先ほど軍備に観ていただいた的に申しましたように断層像をとっていく その時にピントの浮上をキッチンと格段創造コートにとることができますので ct スキャンだがニックが見ていただけることは霧の情報ですねこういったものを取ってい たことができるように使ってまいります in ホールの方へゴーカーを示さずになるんですけれども 1万円を強調点取ったときに 深さ方向に度れるは情報用紙が含まれているのかというのを示した図になります 左側が金本件を外二た場合でミーカーが p ホール型を 平井で当座麻痺になります林本県を開いてておりますと先ほど見ていいただ結構計3強
(07:51) のバージョンにより近くなっています 情報にはをたくさん増えてくるんですけれどもそれだけピント面以外の情報も入ってき ますので 条例と社団睦会た超なってまいります 意向でピンホール系を閉じたりとか左の絵を見ていただきますと一枚の情報のなかに 含まれる情報 パソコン情報力 俺が劇場に薄い状態の情報だけが得られるようになります ただ一方で得られる情報よシグナん量としては 少なくなりますので画像がどうしても暗くなりがちです ですので3分歩い目的に応じてピンホール 経調整してあるあるいは対物レンズごとに最適なピンホールシというのが業者典禮三渓 橋では 制定がされるようになっております して a こちら見ていただきましたのが先ほど短いだけ 腎臓の糸球体の部分になりますけれどもこういった形で影響焦点レーザー顕微鏡をとっ ていくつか聞いたことによってピント面こちらの方さえから撮影してそれぞれ 断層ごとにピントんあっっていうことができます
(09:01) このように a 3 a 3次会的に撮った画像を 立海構築していただいてみていたことができます 例えばこちら左の画像はめだか付の指針で を示したものになりますけれども左目につながっている神経が右脳の方につながってる と神経が交差しているけれども立体的に観察することができるようになっております 又右の図ばです 植物の木の政府になっておりまして赤が植物の掲載後 緑が全分解になりますこういった引退的な半以降を観ていただいたりということも できるようになります 今影響焦点レーザー顕微鏡の特徴になりますけれども一つにはやはり映像を使う観点 工芸 本当に温かい絵をとっきーなことができるということで高圧であるべくになります またへ先ほどのピンホールの効果がございますので特に深さ方向の分解のフィンとの 情報のあったら気をとっていたことができます こういった立体的な画像ですねもの方を見ていただくときには非常に有効なツールに
(10:06) なってまいります ただた x 染色のサンプルですねいいにも対応することができるようになっており ます 例えばその時に重要になってくるのが強い傾向のモレ子にクロストークというものが ないような状態取るということも重要になってまいります 共焦点レーザー顕微鏡を使用しますとこういった 抵抗に乗り込みは排除さ1台で撮影もしていたこそ ができるようになりますので予備正確なデータを追っていただくということが可能に なってまいります そしてデジタルデータこれはもう鉄橋焦点レーザケンプに限ったことではございません けれどもデジタルデータになりますのでこれから三次元的な立体構築あるいは画像の 解析なんかこういったものの測定の中でて簡単に行っていたことができるようになって もう一つ分光イメージングというのは可能になっておりますこれは例えば 近接した蛍光色層分離して行ったりあるいは自家蛍光を本来ある シグナルから術したいということができるようになってまいります here このレース jetty feat rihanna 非常に近接した ap
(11:13) 蛍光色素あったものを分離することができるようになりますし あるいはティラはえーっ文化アティますけども ハァハァしかぁーし基礎一方使用した例なりますポインター この日なかなかこういった言葉で細胞が作らないと思うんですけれどもこういったこと もできますという a 事例になります ではアプリケーション実際の例をいくつかご紹介したいと思います こちらの方はですね高速スキャナを表したイメージングになっておりまして森林再交付 の中でカルシウムロードがどのように変化しているかと言うものを 卓球豪速のタイムラプス増で得たものになっております ぬ鳥示しているのがカルシウムのその経営ブレイクですね れ地元変化を示したものになっております 次はですね厚みのある資料を使った場合の高速イメージの例になります めだかのですね血管を見たございます左の像はですね一断面だけを撮影したものになり
(12:23) ますそれに対しまして a 3ガード像はですね 深さ方向ピンポン名を変えながらえーっ 時間軸の像をとっております 左右見比べていただきますと分かりますように えっ 左側だけですと一断面だけしか取っていませんので血管走行は全部分からない 一段目じゃわからないですけれどもみんなーばイエスと深さ方向の情報も取りながら 撮影をしておりますので会がマルーンのように走っているのかといったことも一体的に 確認していたことができるこう言ったら生きたんでも厚みなる 3フロート使って高速の偉人ができるという例になります もう一つ共存といろいろな研究を用いまして最近ですと イメージングだけではなくてですね機能解析 もうされていらっしゃいますその例としてですねクラフトいうものがございますこれは 蛍光短縮語回復というもの 手裏しておりまして例えば a 蛍光タンパク質を発現させた制裁5 の一部もですね白いで機構当てることによって
(13:30) 短縮をさせてやりますこの退職した部分に もともとの傾向軟白室などに戻ってくるのか その時に戻ってくる速さあるいはどのくらいの分子が戻ってくるのかなといったものを 見ることによってその作業内の 分地の挙動を見る 観察方法になります こちらがその例になりますヒーラー最後の角に a gp 発現させたものを描きましてここの最後でこの価格 ここの部分に グリッチきてあげます a 最初ここの部分が暗くなって徐々に 傾向が戻ってくるとその栄光の戻り具合をこのようにグラフのカーブを借りていただく とこの時に分かることは gree ちまいここ合併傾向の共同がいますで v1をさせて ユニ傾向 回復してくるんですけれどもここで完全には傾向も帰ってこないということがわかり ます ここからか分かることはこの角の部分に動いているものと 後動いていないものがある動いていないものについてはこの無理ちんよってそのまま
(14:38) 短縮したままという一部分だけがモンテ 号機動いてこの殻の中に存在しているといったことがこの g 県からわかるように なってまいります もう一つ機能解析をレイドしましてフレットという経験校共鳴エネルギーを言って実験 がございます これはですね2種類の蛍光分子が非常に近い状態に存在していますと通常ですと 励起光を当てられたこちらの青の運指だけが 蛍光を発するんですけれどもこの2つの郡史概論近いところにいますとこの励起された 分子このエネルギーがこちらの隣がはの黄色い 運指の方に映りまして蛍光を発するのはこちらの acceptor と書かれているこの企業で示されているんして今そういったことを 使う ことによりまして分子同士がどのように協同青果生隣接子を結合しているのから離れて 存在しているのかといったものを見ることができるようになります その例で編 a あるシーンのイメージングになります
(15:46) こちらの方はですね枚最高の中のカルシウムの影響道を示したものになります カルシウムは存在下によってある分子同士が結合すると結合することによって3社の 企業と表示されていたものが徐々に最後の端からですね a だんだんとあーレシーブの伝播が起こっているということが好から a 観察されます 影響焦点レーザー顕微鏡のまとめになりますライフサイエンス研究分野記録で非常に 一般的に使われる イメージング95となっておりまして蛍光顕微鏡と比べましてこのピンフォールの平衡 化によりまして観察参照高画質抵抗性際に発生することができるようになっています またいい厚みのあるサンプルのさ 時限的な控除を観察したりですとか最近ですと高速イメージ 機能解析などさまざまな研究の分野でお使いいただいているイメージの手法になって おります
